藤茶活性成分的分离鉴定及药理作用研究

幸福来敲门

藤茶活性成分的分离鉴定及药理作用研究

何桂霞  

【摘要】：随着社会经济和人们生活水平的提高以及老龄化社会的加速到来，“健康”便成了当今世界研究的主题。目前在生命科学中，氧自由基和抗氧化剂的研究是近年来生物学和医学界非常活跃、非常引人关注的一个研究领域。体内氧自由基产生过多会导致细胞损伤，引起心脏病、脑缺血、癌症和衰老等严重疾病。所以寻找天然的利于人体吸收的清除体内自由基的外源性清除剂，对防止疾病的发生和保持机体健康是十分有益的。 藤茶(Ampelopsis grossedentata)属葡萄科蛇葡萄属中的一种野生藤本植物，我国壮族和瑶族人民将其幼嫩茎叶制成保健茶，用于治疗感冒发热、咽喉肿痛、黄疸型肝炎、疮疖等症，夏天泡茶数同不馊，有“神茶”之称，近年来引起人们极大的关注。

经化学成分分析，发现滕茶是一种富含黄酮类化合物的一种特殊植物，有效部位黄酮总量达40％左右，其中二氢杨梅素(Dihydromyricetin，简称DMY)含量高达25％左右。药理实验证明藤茶总黄酮及其中主要成分DMY具有镇痛、止咳、广谱抗菌、降血压、降血脂、降血糖、抑制肿瘤等多种功效。因此研究藤茶的活性成分及药理作用，对于全面开发、综合利用这一独特的天然植物资源具有非常重要的理论意义和实际应用价值。

对藤茶化学成分的前期研究中已经分出了DMY、杨梅素(Myricetin)等成分。通过药理实验追踪和化学实验发现仍有一些有效成分未得到分离鉴定，同时对其中富含的藤茶总黄酮(TCF)，特别是DMY的抗氧化作用及其稳定性的研究等均未见系统报道。本项课题针对目前藤茶研究中亟待解决的几个问题，选择藤茶为材料，对其所含主要化学成分进行了研究，分离得到了8个化合物，其中6个为首次从藤茶中发现的化合物；建立了藤茶中总黄酮、DMY含量测定的方法，并研究了它们与产地及季节的关系；对藤茶中总黄酮和DMY在动物体内外的抗氧化活性进行了系统的研究；对DMY自身的稳定性进行了考察；对藤茶地上营养器官的形态结构及其黄酮的组织化学定位进行了初步的研究。本论文的研究结果为系统、合理、全面地开发和利用藤茶提供了科学依据。

藤茶活性成分的分离鉴定及药理作用研究

实验研究结果归纳如下：

1.未知活性成分的分离鉴定: 采用硅胶柱、聚酞胺柱层析法对藤茶的石油醚、乙醇、水的提取物进行了分离， 从中得到8个化合物，通过UV、工R、’H一NMR、’3C一NMR、MS等光谱解析鉴定为:二氢 杨梅素(dihydromyrieetin，wl)、杨梅素(myrieetin，wZ)、橙皮素(hesperitin，I)、 三氢梅}皮索(di一lydroquereeti:1，11)、山奈酚(kaemp民r。)一，111)、芹菜素(apigenin， IV)、p一谷幽醇(p一51 t 0 5 t erol，V)、齐墩果酸(oleanolie aeid，Vl)，其中橙皮 素、二氢恻皮素、山奈酚、芹菜素、p一谷幽醇、齐墩果酸6个化合物为首次从藤 茶中发现。 2一卜要成分含量研究: l)采用差示紫外分光光度法测定藤茶，}“1’cF含量。以DMY为对照品，318 nm 为检测波长，对不同产地不同采收期藤茶的叶、茎中的总黄酮进行含量测定。测定 结果显示不同产地的I’CF含量高低有差异_Jl.含量随季节而变化，由3月份到5月份含 量依次增加，5月份藤茶叶中‘fCF含量最高，为41.2一45.4%，而后逐渐一「降，到冬 季11月份落叶时的含量最低，为19.1一19.7沉，。相同情况下叶中含量高于茎中3一4 倍。不同产地的藤茶中TCF含量高低有差异，以江华藤茶含量最高，其次为张家界， 株洲的含量稍低。

2)采川HPLe奋则定藤茶，I，主要单体成分oMY含量。色谱条件iehrosphere，， 柱(150mm x 4.6mm);流动相:甲醇:水:磷酸(25:75:0.1);流速:1 mL/min; 柱温:25℃;检测波长:29(j nm:进样量:2()川』，对不同产地不同采收期藤茶的叶、 茎中的 DMY进行含量测定。测定结果显示，5月份藤茶叶中DMY含量最高 27.9一31 .2%;相同情况一日l卜中含量高于茎「「，3一4倍。不同产地的藤茶中DMY含量高 低有差异，以江华藤茶含量最高，其次为张家界，株洲的含量稍低。

3.主要成分药理作川研究:

1)以黄llg吟一黄嘿吟氧化酶系统产生超氧阴离子自由基的方法，研究了TCF对 氧自由基的清除作用;以CyS一l‘犷系统诱导离体大鼠肝匀浆及vi tc一FeZ‘系统诱导肝 线粒体产生的脂质过氧产物，研究了TCF抗脂质过氧化作用。实验结果显示TCF能 较好地清除氧自由基，其IC，。为14.7以g/‘nL;能抑制离体大鼠肝匀浆自氧化及Cys- FeZ‘系统诱导引起的脂质过氧化，其ECS。分别为9.4 09/mL和38.1 pg/mL，对肝线 粒体也有保护作用，并呈量效依赖关系。说明TCF对氧自由基有清除作用，并能预 防性的对抗超氧阴离子自由基引起的氧化性损伤。

2)采用分光光度法研究了DMY对由vi te一I了eZ‘、CyS一FeZ‘、HZOZ一FeZ‘三种体系诱 导的脂质过氧化产物的影响。实验结果显示，DMY能抑制离体大鼠脑、心、肝匀浆及 线粒体脂质过氧化产物丙二醛(MDA)的生成并表现出剂量依赖关系。说明DMY具有 较好的抗脂质过氧化作用。

3)用正交设计方法建立了小鼠四氯化碳肝损伤模型，考察了TCF和DMY对CC14 诱泞的小鼠急性川一损伤的彩响。，实验结果显示，!巧占都能剂量依赖性地降低CCI;致 小鼠肝损伤血清AIJT、AS’I’值升高，降低肝组织匀浆中MDA的含量

【关键词】：藤茶 活性成分 分离鉴定 总黄酮 二氢杨梅素 抗氧化 稳定性
【学位授予单位】：湖南农业大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2004
【分类号】：R282


【目录】：

【第一章 绪论12-19

• 1 研究目的与意义12-14
• 2 国内外研究动态14-18
• 2.1 蛇葡萄属民族及民间药用植物应用概况14-15
• 2.2 蛇葡萄属植物化学成分研究进展15-16
• 2.3 蛇葡萄属植物药理作用研究进展16-18
• 3 本论文工作目标与研究内容18-19
• 第二章 藤茶中活性成分的分离与结构鉴定19-49
• 1 材料与仪器19-20
• 2 实验方法20-22
• 3 结构分析与鉴定22-48
• 4 小结与讨论48-49
• 第三章 藤茶中黄酮类化合物含量研究49-56
• 1 差示分光光度法测定总黄酮含量49-52
• 1.1 实验材料49
• 1.2 仪器与试剂49
• 1.3 方法与结果49-52
• 2 HPLC测定二氢杨梅素的含量52-54
• 2.1 实验材料52
• 2.2 仪器与试剂52
• 2.3 方法与结果52-54
• 3 小结与讨论54-56
• 第四章 藤茶总黄酮及二氢杨梅素抗氧化作用的研究56-74
• 1 藤茶总黄酮体外抗氧化作用56-63
• 1.1 实验材料56-57
• 1.2 实验方法57-58
• 1.3 结果与分析58-63
• 2 二氢杨梅素体外抗氧化作用63-66
• 2.1 实验材料63
• 2.2 实验方法63-64
• 2.3 结果与分析64-66
• 3 藤茶总黄酮及二氢杨梅素体内对CCl_4致急性肝损伤小鼠的作用66-71
• 3.1 实验材料66-67
• 3.2 实验方法67-68
• 3.3 结果与分析68-71
• 4 小结与讨论71-74
• 第五章 二氢杨梅素稳定性的考察74-86
• 1 实验材料75
• 2 实验方法75-76
• 3 结果与分析76-85
• 4 小结与讨论85-86
• 第六章 藤茶营养器官的形态结构及其黄酮的组织化学定位研究86-92
• 1 仪器与材料86-87
• 2 实验方法87
• 3 观察结果87-89
• 4 小结与讨论89-92
• 全文结论92-94
• 参考文献94-98
• 致谢98-99
• 作者简介99